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안트라닐산 유도체화 및 형광 검출을 기반으로 한 글리코실트랜스퍼라제에 대한 새로운 고성능 액체 크로마토그래피 분석.

분석법은 고성능 액체에 의한 β1-4 갈락토실트랜스퍼라제(GalT-1) 및 α2-6 시알릴트랜스퍼라제(ST-6)의 활성을 측정하기 위해 2-아미노벤조산(2AA; 안트라닐산, AA)의 고유한 라벨링 화학을 사용하여 개발되었습니다. 형광 검출을 이용한 크로마토그래피(HPLC)(Anumula KR. 2006. Advances in fluorescence derivatization methods for high-performance liquid chromatography analysis of glycoprotein carbonates. Anal Biochem. 350:1-23).N-아세틸글루코사민(GlcNAc)과 N-아세틸락토사민은 각각 GalT-1과 ST-6에 대한 수용체로, UDP(uridine diphosphate)-갈락토스와 CMP(cytidine monophosphate)-N-아세틸뉴라민산(NANA)을 기증자로 사용했습니다.효소 산물은 AA로 제자리에서 표지되었고 순상 조건을 사용하여 TSKgel Amide 80 컬럼에서 기질로부터 분리되었습니다.동시 유도체화된 표준 Gal-β1-4GlcNAc 및 NANA-α2-6 Gal-β1-4GlcNAc와 비교하여 피크 면적으로부터 효소 단위를 결정하였다.검정에 대한 선형성(시간 및 효소 농도), 정밀도(분석 내 및 분석 간) 및 재현성이 확립되었습니다.분석법은 분리 및 정제 동안 효소 활동을 모니터링하는 데 유용한 것으로 밝혀졌습니다.분석법은 매우 민감했으며 기존의 방사성 설탕 기반 측정과 동일하거나 더 잘 수행되었습니다.분석 형식은 탄수화물 수용체가 라벨링을 위한 환원 말단을 포함한다면 다른 트랜스퍼라제의 활성을 측정하는 데에도 사용할 수 있습니다.당단백질 수용자에 대한 분석은 IgG를 사용하여 개발되었습니다.짧은 HPLC 프로파일링 방법은 GalT-1 및 ST-6 활성의 신속한 측정을 용이하게 하는 IgG 글리칸(바이안테나리 G0, G1, G2, 모노- 및 디시알릴화)의 분리를 위해 개발되었습니다.또한, 이 프로파일링 방법은 임상 환경에서 IgG 글리칸의 변화를 모니터링하는 데 유용한 것으로 입증되어야 합니다.