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프로테옴 전체 인산화 사건의 분석은 단백질 인산화 네트워크의 엄청난 복잡성으로 인해 여전히 주요 분석 과제입니다.이 작업에서 우리는 phosphoproteome의 전체 분석에 기여하는 능력과 관련하여 Lys-N, Lys-C 및 트립신의 상보성을 평가합니다.정제된 버전의 낮은 pH 강한 양이온 교환을 사용하여 N-말단 아세틸화, 인산화 및 변형되지 않은 펩티드를 효율적으로 분리했습니다.총 5036개의 중복되지 않는 포스포펩티드가 3가지 효소의 조합을 사용하여 단백질 1mg에서 1% 미만의 잘못된 발견률로 식별될 수 있었습니다.우리의 데이터는 상이한 프로테아제로 생성된 포스포펩티드 데이터 세트 사이의 중첩이 미미한 반면, 유사하게 생성된 두 개의 트립신 데이터 세트 사이의 중첩은 적어도 4배 더 높은 것으로 밝혀졌습니다.이러한 방식으로 Lys-N과 트립신을 동시에 사용하면 트립신 단독 사용에 비해 검출된 포스포펩티드 수가 72% 증가한 반면, 트립신 복제 실험은 25% 증가에 그쳤습니다.따라서 트립신 및 Lys-N 데이터에만 집중할 때 4671개의 중복되지 않는 포스포펩티드를 확인했습니다.검출된 부위에 대한 추가 분석은 Lys-N 및 트립신 데이터 세트가 상당히 다른 인산화 모티프가 풍부하다는 것을 보여주었고, 다중프로테아제 접근법이 인프로테옴 분석에서 매우 유용하다는 것을 추가로 입증했습니다.