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퇴행성 연골질환에 대한 재생의학의 임상적용을 저해하는 요인 중 하나는 적절한 세포 공급원이다.연골의 유일한 세포 유형인 연골 세포는 세포 수를 확장하기 위해 배양 조건 하에서 시험관 내에서 성장하여 투명한 연골 조직을 생성하는 능력과 함께 표현형을 잃습니다.이 연구에서 우리는 혈청 및 성장 인자가 없는 3차원(3D) 배양 시스템이 sox9를 포함하는 과정인 체외에서 연골 조직을 형성하는 계대된 연골 세포의 능력을 회복시킨다는 것을 확인했습니다. 세포 수 확장(P2)을 허용하고 인슐린 및 덱사메타손(SF3D)이 보충된 고포도당 함량 배지에서 3D 콜라겐 II형 코팅 막에서 고밀도로 배양됩니다.세포는 단층 확장 후 유동 세포 계측법, 유전자 발현 및 조직학에 의한 3D 배양 후 특성화되었습니다.재분화 이온 동안 신호 전달 경로의 초기 변화가 특징적이었습니다. P2 세포는 99% CD44(+) 및 40% CD105(+)의 전구체 유사 항원 프로필과 영역 간 세포를 암시하는 유전자 발현 프로필을 보여주었습니다.SF3D의 P2는 연골 형성 유전자를 발현하고 세포외 기질을 축적했습니다.Wortmannin을 사용한 HNMPA-(AM3) 또는 PI-3/AKT 키나아제 경로(인슐린 치료에 의해 활성화됨)를 사용한 하향 조절 인슐린 수용체(IR)는 콜라겐 합성을 억제했습니다.HNMPA-(AM3)은 Col2, Col11 및 IR 유전자와 Sox6 및 -9의 발현을 감소시켰습니다.HNMPA-(AM3)-처리된 세포의 공동 면역침전 및 염색질 면역침전 분석은 Sox9와 함께 coactivators Sox6 및 Med12의 결합을 보여주었지만 Sox9-Col2a1 결합을 감소시켰습니다. 우리는 연골 세포의 수를 증가시키고 촉진하는 새로운 배양 방법을 설명합니다. 인슐린 매개 Sox9-Col2a1 결합에 의해 부분적으로 유리질 유사 연골 조직 형성.관절 수리에 사용하기 위해 이 접근법을 통해 생성된 조직의 적합성은 생체 내에서 검사해야 합니다.