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5-플루오로우라실(5-FU)의 여러 대사산물과 두 개의 내인성 모노포스페이트 뉴클레오티드를 구체적으로 정량화하기 위해 액체 크로마토그래피-탠덤 질량 분석법(LC-MS/MS)을 기반으로 하는 독창적인 방법을 개발했습니다.이 분석으로 다음을 결정할 수 있었습니다. , (ii) 세포내 2'-데옥시우리딘-5'-모노포스페이트(dUMP)/티미딘-5'-모노포스페이트(TMP) 비율에 대한 5-FdUMP 농도의 영향 및 (iii) 5-FdUMP의 분비 정도 및 ABC 트랜스포터에 의한 인간 배양 세포의 5-FU.실험 조건 하에서 세포를 5-FU 또는 5-FUrd와 함께 배양했습니다.그런 다음 세포 단백질을 메탄올로 침전시켰다.이 절차는 높은 추출 회수율을 제공했습니다.또한 세포에서 분비되는 5-FU 및 5-FdUMP를 측정하기 위해 배양 배지에서 이들 분자를 정량화했습니다.배지를 직접 주입(5-FU)하거나 Oasis Wax 추출 카트리지(5-FdUMP)를 사용하여 고체상 추출을 수행했습니다.분석 물질의 분리는 이동상으로 포름산암모늄 완충액/메탄올/물(5/5/90, v/v)을 사용하여 등용매 모드의 dC18 Atlantis 3.5μm(100mm × 2.1mm id) 컬럼에서 수행되었습니다.실행 시간은 6.2분을 초과하지 않았습니다.분석물은 음이온 모드에서 전기분무 인터페이스에서 이온화되었습니다.우리는 화합물에 따라 2.5–150 ng mL-1 범위에 걸쳐 방법을 검증했습니다.분석 내 및 분석 간 변동성은 7일 동안 10% 미만이었습니다.모든 화합물은 샘플을 -20°C에서 최소 2주 동안 보관하고 3번의 동결-해동 주기 후에 세포 또는 배양 배지에서 안정했습니다.두 매체 모두 매트릭스 효과가 관찰되지 않았습니다.