제품

콜리신 E1 채널 도메인의 막 토폴로지는 형광 공명 에너지 전달(FRET)에 의해 연구되었습니다.FRET는 기증자로서 유전적으로 암호화된 형광 아미노산(쿠마린)과 FRET 수용체로서 DABMI(4-(디메틸아미노)페닐아조페닐-4'-말레이미드)와 연결된 선택적으로 표지된 시스테인 잔류물과 관련되었습니다.형광성 쿠마린 잔기는 콜리신 채널 도메인 내의 임의의 부위에 선택적으로 혼입될 수 있는 직교 tRNA/아미노아실-tRNA 합성효소 쌍을 통해 단백질에 혼입되었습니다.각각의 변이체는 쿠마린 혼입에 대한 정지(TAG) 돌연변이와 DABMI 부착에 대한 시스테인(TGT) 돌연변이를 포함했습니다.용해성 상태와 막 결합 상태 모두에 대해 FRET 분석을 사용하여 나선 1-6 내의 6개의 나선간 거리를 결정했습니다.FRET 데이터는 채널 도메인의 막 결합 구조에 대한 새로운 통찰력을 제공하는 막 결합 시 나선 3-6 사이의 나선간 거리의 큰 변화를 보여주었습니다.일반적으로 coumarin-DABMI FRET interhelical 효율은 막 결합 시 감소하여 colicin 채널에 대한 우산 모델을 구축합니다.채널 도메인의 폐쇄 상태에 대한 임시 모델은 현재 및 이전에 게시된 FRET 데이터를 기반으로 개발되었습니다.이 모델은 나선 8과 9에 의해 형성된 중앙 막 횡단 헤어핀 주변의 나선 1, 6, 7 및 10의 세포외 측 및 막 계면 결합으로부터 시계 방향으로 나선 1-7의 원형 배열을 제안합니다.